測定原理

      液壓聚焦法 （DC檢測）

      RBC檢測器通過(guò)液壓聚焦法 （DC檢測）計數RBC和PLT。同時(shí)，血細胞比容(HCT)通過(guò)RBC脈沖高度檢測法計算。在該檢測器內，樣本噴嘴將被定位在小孔的前面且與中心對齊。稀釋后的樣本由樣本噴嘴被推入錐形室以后，在前鞘流內的試劑包裹下通過(guò)小孔的中心。

       通過(guò)小孔以后，經(jīng)過(guò)稀釋的樣本被送入捕集管中。這樣就可以防止該區域的血細胞回流，并防止產(chǎn)生假性血小板脈沖。

液壓聚焦法改善了血細胞計數的精確度和重現性。同時(shí)由于血細胞通過(guò)在一條直線(xiàn)上的小孔，所以也可防止產(chǎn)生異常血細胞脈沖。

        使用半導體激光器的流式細胞計數法

使用流式細胞計數法檢測細胞和其它生物粒子的物理和化學(xué)性質(zhì)。該計數法只需很少的樣本就可對這些細胞和粒子進(jìn)行檢測。

       一個(gè)血樣經(jīng)過(guò)抽吸和測量并被稀釋至指定的稀釋比后，再進(jìn)行染色。然后該樣本將被送入貫流分析池中。

這種液壓聚焦單元改進(jìn)了細胞計數的精確度和重現性。同時(shí)，由于血細胞顆粒是排成一行通過(guò)貫流分析池的中心，故而防止產(chǎn)生異常血液脈沖并可減少對貫流分析池的污染。

        半導體激光束 （波長(cháng)： 633 nm）通過(guò)貫流分析池照射到血細胞上。前向散色光和側向散色光將被光電二極管接收，側向熒光則由APD光電二極管接收。光信號被轉化為電脈沖，從而可以得到有關(guān)血液細胞的信息。

        前向散射光和側向散射光

        當障礙物經(jīng)過(guò)光通路時(shí)，光束就在每個(gè)障礙物的不同方向上產(chǎn)生出散射光。這種現象稱(chēng)為光散射。通過(guò)檢測散射光，可以得到有關(guān)細胞體積大小和材質(zhì)的信息。

         同樣地，當一束激光照射到血細胞顆粒上時(shí)，就產(chǎn)生光散射。散射光的強度取決于諸如顆粒直徑和觀(guān)察角度等因素。本單元對前向散射光進(jìn)行檢測，提供有關(guān)血液細胞體積大小的信息；同時(shí)對側向散射光進(jìn)行檢測，提供有關(guān)細胞內部 （如細胞核的體積大?。┑男畔?。

     側向熒光

     當光照射到經(jīng)過(guò)熒光染色的血液細胞等的熒光材料上時(shí)，就會(huì )產(chǎn)生比入射光波長(cháng)更長(cháng)的光。隨著(zhù)染色濃度的增加，熒光強度也隨之增長(cháng)。通過(guò)測量熒光強度，可以得到有關(guān)血細胞染色程度的信息。熒光向所有方向散射，本儀器檢測側向發(fā)出的熒光。

      SLS-血紅蛋白法

      在過(guò)去，用于自動(dòng)測量血紅蛋白的主流辦法是：氰化高鐵血紅蛋白法和氧合血紅蛋白法。但是，當將這些方法用于像本儀器這樣的大型全自動(dòng)檢測儀時(shí)，它們既有優(yōu)點(diǎn)又有缺點(diǎn)。

氰化高鐵血紅蛋白檢測法是1966年由國際血液學(xué)標準委員會(huì ) （ICSH）作為一種國際標準方法而提出的。但是由于該方法的血紅蛋白轉化速度較慢，并且以多樣本處理為前提，該方法實(shí)際上不適用于自動(dòng)檢測。而且，由于該方法使用了有毒性的試劑氰化物，所以必須對廢液進(jìn)行處理，從而從環(huán)保的角度來(lái)講，該方法并不受推崇。

       目前，特別是對于排出大量廢液的大型全自動(dòng)檢測儀而言，這不是一種合適的檢測方法。

相反，氧合血紅蛋白檢測法的血紅蛋白轉化速度很快，因為血紅蛋白很容易轉化為氧合血紅蛋白。同時(shí)，由于該方法不使用諸如氰化物這樣的毒性物質(zhì)，所以該方法適用于自動(dòng)檢測。然而，該方法卻不能將高鐵血紅蛋白轉化為氧合血紅蛋白。對于正常人體血液，該方法沒(méi)有問(wèn)題。但是對于含有大量高鐵血紅蛋白的樣本 （如質(zhì)控品樣本） ，就會(huì )導致測量值低于真實(shí)值。

        SLS-血紅蛋白檢測法是一種利用了上述兩種方法優(yōu)點(diǎn)的檢測方法。

與氧合血紅蛋白檢測方法一樣，SLS-血紅蛋白檢測法的血紅蛋白轉換速度很快，而且該方法不使用毒性物質(zhì)，這使該方法成為自動(dòng)檢測的一個(gè)合適的方法。

同時(shí)，由于該方法可以用于檢測高鐵血紅蛋白，所以該方法也可以準確的檢測含有高鐵血紅蛋白的血液 （如質(zhì)控品） 。

 測定項目與通道

       WBC測定

       WNR通道

       WNR通道主要是用于計數白細胞和有核紅細胞的通道。

通過(guò)使用半導體激光的流式細胞計數法，可描畫(huà)出二維的散點(diǎn)圖，X軸表示側向熒光強度（SFL），Y軸表示前向散射光強度（FSC）。

       此散點(diǎn)圖顯示有核紅細胞、嗜堿基球、嗜堿基球以外的白細胞及碎片 （溶血的紅細胞和血小板等）的各組。

         WDF通道

         WDF通道主要是為分類(lèi)白細胞的通道。

通過(guò)使用半導體激光的流式細胞計數法，可描畫(huà)出二維的散點(diǎn)圖，X軸表示側向散射光強度（SSC），Y軸表示側向熒光強度（SFL）。

        此散點(diǎn)圖顯示淋巴球、單球、嗜酸球、嗜堿基球+嗜中球以及碎片的各組。

         WPC通道

         WPC通道是用于檢測骨髓芽球等未成熟細胞及淋巴球系的異常細胞的通道。

通過(guò)使用半導體激光的流式細胞計數法，可描畫(huà)出二維的散點(diǎn)圖，X軸表示側向散射光強度（SSC），Y軸表示側向熒光強度 SFL）。

        此散點(diǎn)圖顯示未成熟細胞、異常細胞及成熟白細胞的各組。

         RBC/阻抗法檢測的PLT數測定

         RBC粒度分布

RBC （紅細胞計數）是在一個(gè)低界標（LD）和高界標（UD）之間計算得出的細胞計數，這兩個(gè)界標分別自動(dòng)設置在25 - 75 fL和200 - 250 fL之間。

        對顆粒大小分布情況的檢查將有助于了解異常情況，其中包括在不同界標水平上的異常相對頻率、兩個(gè)或多個(gè)峰值的存在以及異常的分布寬度。

        本儀器根據如下所示的兩種方法來(lái)表達紅細胞分布寬度 （RDW）。

RDW-SD

        假設峰值高度為100%，在20%頻率水平上的分布寬度即為RDW-SD。使用的單位為飛升（fL）（1 fL = 10-15L）。

        RDW-CV

        點(diǎn)L1和L2在總分布區域中的出現頻率為68.26%，使用下列方程計算RDW-CV：

          PLT粒度分析

          PLT （血小板計數）是在一個(gè)低界標 （LD）和高界標 （UD）之間計算得出的細胞計數，這兩個(gè)界標分別自動(dòng)設置在2 - 6 fL和12 - 30 fL之間。

對PLT顆粒大小分布情況的檢查將有助于了解導常情況，其中包括低界標上的相對頻率、異常分布寬度以及多個(gè)峰值的存在。

         PDW （計算的血小板分布幅度）

假設峰值高度為100%，在20%頻率水平上的分布寬度即為PDW。使用的單位為飛升（fL）（1 fL = 10-15L）。

         l  P-LCR （大型血小板比率）

         P-LCR為由12 fL界標或更大界標得到的巨型血小板的比值。計算時(shí)，將固定界標與高界標之間的顆粒數，同低界標與高界標之間的顆粒數相比而得到一個(gè)比值。

         MPV （平均血小板體積）

         使用下列計算式計算MPV：

         PCT：PCT稱(chēng)為血小板血細胞比容或血小板容積比，并根據PLT頻率進(jìn)行加權。

由于表現的方法不同，所得到粒度分布的印象會(huì )差別很大。由于粒度分布的寬度會(huì )由于所使用的表現方法不同而完全不同，所以需要特別予以注意。

        本儀器使用一個(gè)常規的粒度分布表現（通常表現）和另外一種粒度分布表現法（粒度正常范圍表現），使用該方法可使用戶(hù)根據粒度分布直觀(guān)地得到大量信息。

        通常表現

        將粒度分布的峰值設置為全尺度（顯示粒度分布時(shí)的最大高度），該表示方法將分布情況以規范的形式表示出來(lái)。

 特長(cháng)：可在同一尺度上觀(guān)察具有不同計數值的粒度分布形式。粒度分布的寬度可進(jìn)行直觀(guān)對比。

 支持的顯示領(lǐng)域：RBC和阻抗法檢測的PLT數。

        粒度正常范圍表現

        此表現方法不是將粒度分布的峰值作為全尺度（顯示粒度分布時(shí)的最大高度）。而是將經(jīng)驗求得的粒度正常范圍的峰值作為全尺度，該表示方法將分布情況以規范的形式表示出來(lái)。同時(shí)，此方法疊加粒度分布的正常范圍。

但是，如果粒度分布的峰值比粒度正常范圍的峰值要高，就將粒度分布的峰值作為全尺度來(lái)表現。在這種情況下，粒度正常         范圍就根據粒度分布峰值的高度成比例減小。

       將大量健康人的粒度分布疊加起來(lái)，然后利用第10個(gè)百分位到第90個(gè)百分位之間的區域，就可以得出粒度正常范圍。

特長(cháng)：可從粒度分布圖上直觀(guān)地看出顆粒數的大小。如果粒度分布偏離正常范圍，可以立即知道粒度分布形式出現了異常。

 支持的顯示領(lǐng)域：如果將設置值預置為正常范圍，則可以支持顯示RBC和PLT的粒度分布。

         PLT-F通道*

         PLT-F通道用于正確計數血小板，特別是低值的血小板數。

通過(guò)使用半導體激光的流式細胞計數法，可描畫(huà)出二維的散點(diǎn)圖，X軸表示側向熒光強度（SFL），Y軸表示前向散射光強度（FSC）。

         此散點(diǎn)圖顯示血小板、一部分紅細胞、一部分白細胞及碎片的各組。

        RET測定

        RET通道*

        通過(guò)使用半導體激光的流式細胞計數法，可描畫(huà)出二維的散點(diǎn)圖，X軸表示側向熒光強度（SFL），Y軸表示前向散射光強度（FSC） 。

        此散點(diǎn)圖顯示網(wǎng)狀紅細胞、成熟紅細胞和血小板各組。

根據熒光的強度，將散點(diǎn)圖劃分為三個(gè)RET區，并計算各區中網(wǎng)織紅細胞與網(wǎng)織紅細胞總數的比率。

      網(wǎng)狀紅細胞比率:

       網(wǎng)狀紅細胞數:

        低熒光比率：

LFR = 100 - HFR - MFR

中熒光比率：

       高熒光比率：

         未成熟網(wǎng)狀紅細胞指數:

         IRF = MFR + HFR

         LFR——低熒光比率

         MFR——中熒光比率

         HFR——高熒光比率

         IRF——未成熟網(wǎng)狀紅細胞指數

         RET-He（網(wǎng)織紅細胞血紅蛋白含量）是由Sysmex開(kāi)發(fā)出的獨特項目,它使用網(wǎng)狀紅細胞散射光信號和專(zhuān)有的Sysmex專(zhuān)用的運算法則。

                                                                                                                                                      ——摘自XN系列操作手冊