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經(jīng)驗分享

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關(guān)于血清蛋白電泳——您知道多少(一)檢測技術(shù)

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      血清蛋白電泳(serum poteinelectrophoresis,SPE)是利用蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子大小的不同,在同一PH值緩沖液中所帶電荷的差異性,在電場(chǎng)中泳動(dòng)速度和方向不同,使不同的蛋白質(zhì)分子具有不同的電泳遷移率,從而把血清蛋白分為不同的區帶,然后不同的區帶進(jìn)行定量分析。

檢測方法

      血清電泳的檢測方法有多種,有Tiselius自由電泳,醋酸纖維素膜電泳,瓊脂糖凝膠電泳,淀粉膠電泳,聚丙烯酰胺凝膠圓盤(pán)電泳,濃度梯度板狀膠電泳,微型雙向電泳,毛細管電泳等。電泳方法不同,分離血清蛋白的能力則有很大差異。目前,臨床實(shí)驗室檢測中采用的瓊脂糖凝膠電泳和毛細管電泳。

1瓊脂糖凝膠電泳法檢測血清蛋白電泳:

      瓊脂糖主要通過(guò)氫鍵而形成凝膠。電泳時(shí)因凝膠含水量大(98-99%),近似自由電泳,因為固體支持物的影響少,故電泳速度快,區帶整齊。而且由于瓊脂糖不含帶電荷的基團,電滲影響很少,是一種較好的電泳材料,分離效果較好。

      瓊脂糖凝膠電泳分離血清蛋白方法簡(jiǎn)單。將血清蛋白樣本通過(guò)加樣梳點(diǎn)在瓊脂糖凝膠上然后將凝膠置于電場(chǎng)中,此時(shí)血清中的不同蛋白質(zhì)就會(huì )在電場(chǎng)中發(fā)生移動(dòng),在電泳結束時(shí)根據使用緩沖液的不同,蛋白質(zhì)被分五個(gè)區帶或六個(gè)區帶,然后將凝膠烘干,使用對蛋白親和力強的氨基黑燃料進(jìn)行染色,通過(guò)光密度儀或掃描儀對各個(gè)區域的蛋白檢測,從而得到血清蛋白各組分的百分比濃度,也可以測定總蛋白的濃度后,計算出各個(gè)區帶的濃度值。


2.  毛細管電泳法檢測血清蛋白電泳:

     毛細管電泳(Caillary Electrophoresis)簡(jiǎn)稱(chēng)CE,是一類(lèi)以毛細管為分離通道,以高壓直流場(chǎng)為驅動(dòng)力的新型液相分離分析技術(shù)。毛細管電泳(CE)是由Jorgenson和Lukacs在1981年首先提出,他們使用了75mm的毛細管柱,用熒光檢測器對多種組分實(shí)現了分離。

     毛細管電泳和高效液相色譜(HPLC)一樣,同是液相分離技術(shù)。無(wú)論從效率、自動(dòng)化、檢測速度、樣品用量和成本來(lái)說(shuō),毛細管電泳都顯示了一定的優(yōu)勢。毛細管電泳(CE)除了比其它色譜分離分析方法具有效率更高、速度更快、樣品和試劑耗量更少、應用面同樣廣泛等優(yōu)點(diǎn)外,其儀器結構也比高效液相色譜(HPLC)簡(jiǎn)單。

血清蛋白在使用毛細管電泳檢測后可以得到六個(gè)區帶,即將血清蛋白分為六個(gè)組分。


分類(lèi)及參考區間

     1. 瓊脂糖凝膠法分類(lèi):目前臨床實(shí)驗室使用瓊脂糖凝膠電泳檢測血清蛋白電泳主要分為5個(gè)區帶。具體分類(lèi)與參考區間見(jiàn)下表:


     2. 毛細管電泳法分類(lèi):血清蛋白電泳主要分為6個(gè)區帶。具體分類(lèi)與參考區間見(jiàn)下表:


臨床應用

      血清蛋白常被用做作為下列疾病監控和診斷。

      1.急性感染性疾病

      2.慢性感染性疾病

      3.蛋白丟失類(lèi)疾病,如腎臟疾病、胃腸道疾病、皮膚類(lèi)疾?。齻∪耍?、滲出液和漏出液相關(guān)疾病、肝臟疾病等

      4.單克隆免疫球蛋白血癥(多發(fā)性骨髓瘤等疾?。?/span>

      5.在常規實(shí)驗室可以觀(guān)察到的異常結果。紅細胞沉降率加快,蛋白尿,血清總蛋白濃度增高或降低。